摘要:目的探討“醒腦開竅”針刺法對缺血性腦卒中大鼠行為學影響,為針刺**缺血性腦卒中提供理論依 據。方法將80只SD大鼠隨機分為電針組、電針對照組、模型組、假手術組,每組20只。采用熱凝閉法制造大鼠大 腦中動脈閉塞模型。電針刺激在造模成功24 h內進行,采取“醒腦開竅”法,電針組取穴水溝、百會和雙側內關、三陰 交,電針30 min/次,1次/d,每7 d為1療程(連續針刺6 d,后休息1 d),共14 d。余各組抓取、固定方法參數等同 電針組,但不針刺。各組的大鼠在7 d、4 d隨機各取10只進行神經功能評估、Barnes記憶分析及滾筒掉落時間觀 察記憶及運動功能。結果電針后,Barnes記憶持續時間較模型組顯著延長CP<0.001),進入隱藏區的潛伏期較模型 組顯著縮短CP<0.001),滾筒掉落時間較模型組明顯延長CP<0.001)。結論“醒腦開竅”針刺的方法能改善缺血性腦 卒中大鼠記憶、運動功能等行為學。Barnes記憶分析系統及滾筒掉落時間可客觀地反映大鼠記憶及運動功能的變 化,對于電針對大鼠行為學實驗研宄有重要意義。
腦血管**是威脅人類健康的重大**之一,包 括缺血性和出血性兩類[1]。缺血性腦血管病(ischemic cerebrovascular disease,ICVD)在老年人中具有高發 病率、患病率、致殘率和死亡率,且發病逐漸年輕化。 加大腦血管病防治力度,改善預后,預防并發癥,提高 腦血管**的療效是一項刻不容緩的重任。目前,雖 然對ICVD的**取得了較大的進步,在溶栓和(或) 取栓同時,也可使用神經保護劑來避免或減少再灌 注損傷,但仍無一種神經保護的**可使患者從中 獲益[2],研究表明電針在ICVD中的應用中能促進其 功能恢復[3],己是缺血性腦血管病的常規治法。本實 驗主要通過電針來干預腦缺血大鼠模型,為針刺** ICVD提供實驗研究依據。
1材料
1.1實驗動物選擇18月齡,雄性,體質量200?250 g的SD大鼠80只,均購買并飼養于安徽中醫 藥大學實驗動物中心,預適應1周后方開始實驗。 大鼠選用清潔級顆粒飼料喂養,并予自由飲食及飲 水,視墊料清潔的程度更換墊料。飼料和墊料均購買于安徽中醫藥大學實驗動物中心,飼養環境模擬 標準日夜系統。
1.2實驗儀器G6805型電針**儀:蘇州醫療用 品廠有限公司;電凝器;牙科鉆;華佗牌一次性針灸 針:蘇州,規格為直徑0.2 mm,針身長0.5寸;Barnes 迷宮測試板、圓形滾筒:上海欣軟XR-XB108型巴恩斯迷宮視頻分析系統。
2實驗方法
2.1實驗分組80只SD大鼠隨機分為假手術組(該組只行血管分離)、模型組、電針對照組、電針組, 每組20只。
2.2大腦中動脈閉塞大鼠模型的建立及成功與否檢測的方法在室溫25 °C條件下,SD大鼠稱重后,根 據羅燕等[4]提出的熱凝閉大腦中動脈法制造局灶性 腦缺血大鼠模型:將SD大鼠右側臥位固定于手術臺 上,去除左側顳頂部的鼠毛,碘伏對顳頂部局部皮膚 **。左眼與左耳之間切開皮膚,鈍性分離顳肌,暴露 出顳骨翼板,術中避免損傷周圍血管及神經等。用牙 科鉆經顳骨翼板鉆至硬腦膜,用小咬骨鉗向下咬去部分顱骨,暴露大腦中動脈,用電凝器來凝閉大腦中動 脈(嗅束到大腦下靜脈),后縫合顳肌及皮膚。
假手術組:同上操作到暴露大腦中動脈,不進行 熱凝閉。大鼠蘇醒后參照Zea Longa E等提出的神經行 為學評估法進行評分,評分1~3分表示造模成功,采 用差額補充的方法保證每組實驗的例數。
2.3處理方法電針組:造模成功后將不予麻醉的 大鼠固定在自制鼠夾上。根據華興邦等[6]制定的大 鼠針灸穴位進行定位,選用“醒腦開竅”針刺法,主 穴取水溝、百會和雙側內關、三陰交。先用捻轉、提插 瀉法刺激雙側內關1 mm至筋間,刺激1 min,留針 30 min;次用雀啄法由鼻中隔下部向上斜刺水溝1 mm,強刺激1 min;再應用提插法直刺三陰交5 mm, 持續1 min;*后刺百會穴,取向前或向后斜刺2 mm,采用平補平瀉捻轉手法刺激1 min,留針30 min。留針期間,分別用G6805電針**儀連接內關 和三陰交穴位的針柄,施以疏密波,調整電壓為2~4 V,頻率為2/100 Hz,以針刺部位輕微抖動為刺激強 度。第1次針刺在造模成功后的24 h內進行,以后每 天上午固定時間針刺1次,每7 d為1個療程(連續 針刺6 d,休息1 d)[8。
電針對照組:SD大鼠不進行任何手術,抓取、固 定方法、針刺穴位、方法、頻率、電針刺激參數等同電 針**組。
假手術組、模型組:抓取、固定方法參數等同電針 組,但不進行針刺。
2.4觀察指標
2.4.1大鼠神經行為學評分[5] 0分:無神經缺損癥狀;1分:將大鼠提尾倒懸時,左側前爪不能完全伸 展;2分:爬行時左側轉圈;3分:行走困難、向左側傾 倒;4分:不能自發行走,意識喪失。
2.4.2 Barnes記憶分析系統檢測訓練過程:將大鼠 逐只放在圓形漆黑Barnes迷宮測試板上,測試板的 周圍有20個洞口,底部放置底盒的一個洞口稱之為 隱藏區,其余稱之為暴露區,每次訓練開始時將大鼠 放置于隱藏區,讓其適應30 s,然后將其放在迷宮中 央,自由選擇進入隱藏區,每次訓練240 s,每只老鼠 做完以后都用酒精對迷宮進行擦拭。每天下午每只大 鼠連續訓練2次,連續訓練6 d。
測試過程:第1 d訓練結束后按分組測試,然后 連續訓練6 d后第7 d開始測試,按分組開始測試, 測試過程同訓練過程,每只測試2次,Barnes迷宮反映了動物的空間記憶功能。
2.4.3滾筒掉落時間檢測選用直徑20 cm圓形滾 筒,設定轉速為5轉/min,測試時間為5 min,按照分 組將大鼠放在滾筒中,傾斜60。,每次可測試3只大 鼠,每只測試3次,記錄大鼠掉落平臺時間,*長測試 時間為 5 min。
2.5統計學方法所有計量資料均用均數±標準 差(X± s)表示,Barnes記憶持續時間、大鼠進入隱藏 區的次數、進入的潛伏期以及滾筒掉落時間等參數 的比較采用單因素方差分析。統計結果,均由SPSS for windows 19.0自動運算完成。P<0.01為有顯著統 計學意義,P<0.05為有統計學意義,P>0.05為無統 計學意義。