摘要 ： 目的 進(jìn)一步明確鉤吻素子是否具有抗焦慮作用 。 方法 以大鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)為動(dòng)物模型 ， 評價(jià)鉤吻素子單次皮下注射給藥和連續(xù)皮下注射給藥的抗焦慮活性及特點(diǎn) 。 結(jié)果 鉤吻素子能顯著增加大鼠進(jìn)入高架十字迷宮開臂次數(shù)和在開臂的停留時(shí)間百分率（P＜ ０ ． ０５ ，P ＜ ０ ． ０１） ； 鉤吻素子在實(shí)驗(yàn)劑量下對大鼠自主運(yùn)動(dòng)活性無影響（P ＞ ０ ． ０５） 。 結(jié)論 鉤吻素子可能具有抗焦慮作用 。
關(guān)鍵詞 ： 鉤吻素子 ； 焦慮 ； 高架十字迷宮
焦慮癥（anxiety disorders）又名焦慮障礙 ，或者焦慮精神性** ， 是一類以發(fā)作性或持續(xù)性情緒焦慮和緊張為主要特征的精神性**。 焦慮癥的發(fā)病率逐年上升 ， 嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量 。 ****是目前應(yīng)用*廣泛 、*有效的**手段。 然而 ，經(jīng)典的一線抗焦慮藥在**焦慮癥的同時(shí) ， 往往具有**依賴 、** 、性功能障礙等**反應(yīng) ， 使其臨床應(yīng)用受到限制， 因此 ， 亟待研發(fā)有效**的新型抗焦慮藥 。 鉤吻為馬錢科胡蔓藤屬植物 ，中國鉤吻盛產(chǎn)于閩 、桂 、浙等地 ， 其主要成分為吲哚類生物堿 ，含有數(shù)十種生物堿單體， 其中鉤吻素子（koumine） 為國產(chǎn)鉤吻生物堿單體中含量*高的一種有效成分 。 本實(shí)驗(yàn)室前期采用小鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)和明暗穿梭箱測試方法 ， **觀察到鉤吻素子具有顯著的抗焦慮作用。 然而 ， 鉤吻素子抗焦慮作用有待于在更多的焦慮動(dòng)物模型上確證 。 本文擬在此基礎(chǔ)上 ， 采用單次給藥和連續(xù)給藥 ２ 種給**式 ， 考察鉤吻素子在大鼠高架十字迷宮模型中的抗焦慮作用及其特點(diǎn) 。
1 儀器與材料
1 ． 1 儀器 XR-XG201型 大鼠高架十字迷宮（由上海欣軟信息科技有限公司提供）
1 ． 2 試藥 鉤吻素子粉末 ， 由本課題組分離純化 ， 并經(jīng)高效液相色譜鑒定 ， 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 ９９ ． ２％ ，臨用時(shí)用生理鹽水配成所需質(zhì)量濃度的溶液 ；***注射液 ，天津金耀氨基酸有限公司 ，批號 １０１０１８１ ，用生理鹽水配成所需質(zhì)量濃度的溶液 ， 新鮮配制 。
1 ． 3 動(dòng)物 清潔級雄性 Wistar 大鼠 ，體質(zhì)量 １８０ ～２００g ， 許可證號 ：SCXK （滬）２０１２‐０００２ ，上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供 。 在光暗周期 １２／１２ h（光照時(shí)間 ８ ： ００ ～ ２０ ： ００） 、恒濕度（５０％ ± ５％ ） 、恒溫（２４ ± ２ ℃ ）環(huán)境飼養(yǎng) ， 自由進(jìn)食和飲水 ， 每 ２ d 換 １ 次墊料 ， 動(dòng)物室保持安靜 。 實(shí)驗(yàn)前 ７ d 每天撫摸大鼠１ ～ ２ min ， 減少無關(guān)刺激對實(shí)驗(yàn)的影響 。 給藥前 １ h將大鼠移至實(shí)驗(yàn)室 ，使之熟悉環(huán)境 ，消除陌生環(huán)境對大鼠的影響 。 所有針對大鼠的實(shí)驗(yàn)操作均遵守國際和本地實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用和保護(hù)委員會(huì)頒布的條例 。
2 方法
2 ． 1 動(dòng)物分組及給藥 大鼠隨機(jī)分為對照組（生理鹽水）、***（diazepam ，DZP）陽性對照組（０ ． ５ mg · kg － １ ）及鉤吻素子 ０ ． ７５ ，１ ． ５ 和 ３ mg · kg － １ 劑量組 ， 每組 ７～ １９ 只大鼠 ，按 ０ ． ００５ mL · g － １ 頸背部皮下單次量注射給藥 １ h 后 ，于 ９ ： ００ ～ １３ ： ００ 進(jìn)行行為學(xué)測試 ；另取大鼠隨機(jī)分為對照組 （生理鹽水 ） 、DZP 組
（０ ． ５ mg · kg － １ ）及鉤吻素子 ０ ． １８７５ ，０ ． ７５ ，１ ． ５ 和３ mg · kg － １劑量組 ， 每組 ７ ～ １５ 例 。 ０ ． ００５ mL · g － １ ，頸背部皮下注射給藥 ， 每天 １ 次 ，連續(xù) ７ d（其中 DZP組則第 １ ～ ６ d 給予等體積生理鹽水 ，第 ７ d 給予DZP ０ ． ５ mg · kg － １ ） ， 各組于 d ７ 末次給藥 １ h 后于９ ： ００ ～ １３ ： ００ 進(jìn)行行為學(xué)測試 。
2 ． 2 行為學(xué)測試 將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物迅速置于迷宮的中央開闊部 ， 使其頭部正對其中一個(gè)開臂 ，通過上方的攝像機(jī)拍攝 ５ min 內(nèi)動(dòng)物的活動(dòng)情況 ，記錄下述指標(biāo) ：① 封閉臂進(jìn)入次數(shù)（close arm entry ，CE） ；② 開放臂進(jìn)入次數(shù)（open arm entry ，OE） ；③ 開放臂停留時(shí)間（open arm time ， OT ） 。 通過以上行為學(xué)指標(biāo)分別計(jì)
算下列指標(biāo) ： 動(dòng)物進(jìn)入開放臂和封閉臂的總次數(shù)（to‐tal arm entries） ； 動(dòng)物進(jìn)入開放臂次數(shù)比例（OE％ ） ，即 OE／（CE ＋ OE） × １００％ ；動(dòng)物在開放臂停留時(shí)間比例（OT ％ ：OT ／總時(shí)間 × １００％ ） 。
2 ． 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS １３ ． ０ for Windows 軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算 。 數(shù)據(jù)用均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)誤（mean ± S ．E ．M ）表示 ，兩組間均數(shù)比較采用雙側(cè) t檢驗(yàn) ，多組數(shù)據(jù)間采用 one‐way ANOVA 方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理 ， 差異有顯著性時(shí)再用 LSD‐post hoc 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 P ＜ ０ ． ０５ 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 。
4 討論
目前 ，焦慮動(dòng)物模型包括各種改進(jìn)型多達(dá) ３０ 種以上 ， 其根據(jù)行為模式主要包括兩大類 ：基于動(dòng)物非條件反射的模型和基于條件反射（傳統(tǒng)學(xué)習(xí)模式）的模型 。 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)（elevated plus‐maze test ，EPM ）是基于動(dòng)物對新異環(huán)境的探究特性和對高懸敞開臂的恐懼形成的動(dòng)物矛盾沖突狀態(tài)的原理 ， 建立的非條件反射模型 ， 是目前應(yīng)用*廣泛的檢測動(dòng)物焦慮行為的經(jīng)典模型之一 ， 在精神藥理學(xué)研究中應(yīng)用廣泛。 隨著精神藥理學(xué)的發(fā)展 ，EPM 除了用于大鼠 、小鼠的焦慮行為 ， 還可用于評價(jià)同屬于嚙齒類的其他動(dòng)物焦慮行為 ， 如豚鼠 。 評價(jià)**是否具有抗焦慮作用 ， 需在多種模型上從多個(gè)角度驗(yàn)證 。 因此 ，本文選用大鼠高架十字迷宮模型 ， 進(jìn)一步評價(jià)鉤吻素子的抗焦慮作用 。 在 EPM 中 ， 動(dòng)物進(jìn)入開臂次數(shù)和在開臂滯留時(shí)間 ， 充分地反映了動(dòng)物的焦慮狀態(tài) ， 相比之下 ，總?cè)氡鄞螖?shù)則反映了動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活性 。 同時(shí) ， 我們也發(fā)現(xiàn)基于動(dòng)物非條件反射行為基礎(chǔ)建立的 EPM 模型 ， 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中很容易被實(shí)驗(yàn)條件影響 ， 例如 ：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇（種屬 、年齡 、性別 、健康狀態(tài)） 、動(dòng)物對環(huán)境的適應(yīng) 、實(shí)驗(yàn)條件基本保持一致（實(shí)驗(yàn)操作者 、燈光、氣味） 、飼養(yǎng)條件 、測試時(shí)間等 。 ***是經(jīng)典的苯二氮 類抗焦慮** ，其起效快 ，作用顯著 ， 是焦慮動(dòng)物模型中*常用的陽性對照藥之一，在單次給藥和連續(xù)給藥 EPM 模型中 ， 我們均可觀察到***能夠顯著提高動(dòng)物開臂的進(jìn)入次數(shù)以及在開放臂的停留時(shí)間 ， 與文獻(xiàn)報(bào)道一致， 說明模型穩(wěn)定 。
有研 究 指 出 ，北 美 鉤 吻 總 生 物 堿 在 劑 量 為１５０ mg · kg － １時(shí) ， 能顯著性地提高小鼠在高架十字迷宮中進(jìn)入開放臂的次數(shù)和時(shí)間。 在小鼠明暗穿箱實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn) ， 北美鉤吻總生物堿能顯著提高小鼠在明箱中的停留時(shí)間和明暗箱穿梭次數(shù)，顯示出顯著的抗焦慮作用 。 鉤吻生物堿單體鉤吻素甲和鉤吻素子在小鼠明暗穿箱模型中 ， 也顯示出顯著的抗焦慮作用。 此外 ， 鉤吻素子與其他鉤吻生物堿單體相比 ， 毒性相對較小（小鼠 LD５０ 為 ９９ ． ０ mg · kg － １ ，sc） ，初步提示了鉤吻素子可能具有高效 、低毒的抗焦慮作用 。 在此基礎(chǔ)上 ， 本文采用大鼠高架十字迷宮為動(dòng)物模型 ， 從不同角度進(jìn)一步探討鉤吻生物堿中鉤吻素子的抗焦慮作用和特點(diǎn) 。
文中結(jié)果提示 ， 鉤吻素子在大鼠高架十字迷宮模型中呈現(xiàn)出與***一致的抗焦慮作用 ， 作用呈劑量依賴性 。 有趣的是 ， 我們發(fā)現(xiàn)在大鼠高架十字迷宮單次給藥和連續(xù)給藥時(shí) ， 鉤吻素子的抗焦慮作用并不是呈經(jīng)典的線性關(guān)系 。 其原因可能是鉤吻素子在一定范圍內(nèi)達(dá)到了抗焦慮作用的*大效應(yīng) ， 其抗焦慮作用不再隨著**劑量的增加而增強(qiáng) ， 所以出現(xiàn)與焦慮相關(guān)的腦區(qū)對高劑量鉤吻素子反而不敏感 。 由此可見 ，在應(yīng)用鉤吻素子抗焦慮時(shí)要嚴(yán)格控制其劑量 。 此外 ，我們還觀察到鉤吻素子對動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活性并無顯著影響 ， 說明其發(fā)揮抗焦慮作用的同時(shí) ， 無**催眠作用 。
綜上所述 ， 鉤吻素子可能有抗焦慮作用 ， 并具有高效 、低毒的特征 ， 有望成為**焦慮癥的新型** 。 鑒于焦慮動(dòng)物模型的多樣性， 其抗焦慮作用還有待于在更多的模型上確證 ， 其抗焦慮作用的機(jī)制也有待探究 。
