摘要目的探討紫果西番蓮葉提取物的抗焦慮作用及其機制。方法60只小鼠隨機分為空白對照組、陽性對照組和提取物大、中、小劑量組共5組。提取物大、中、小劑量組分別灌胃紫果西番蓮提取物800，400，200 mg·kg～·d～，陽性對照組給予***2 zng·kg～·d～，空白對照組灌胃等容積1％羧甲基纖維素鈉，各組連續給藥7 d。以高架十字迷宮(EPM)實驗為動物模型，考察紫果西番蓮葉的抗焦慮活性；用聚合酶鏈反應(PCR)法對擴增產物進行分析。結果紫果西番蓮葉醇提物(400，800 rng·kg-。·d-1)能增加小鼠在開臂內運動時間和次數百分率，并且提高小鼠在開場中央區的次數；實時熒光定量PCR法分析表明，紫果西番蓮葉醇提物(400，800 rng·kg一·d_1)能上調EPM焦慮小鼠腦組織中GABAA受體0【，亞型和0【，亞型mRNA表達水平。結論 紫果西番蓮葉醇提物具有明顯的抗焦慮作用，其作用機制可能與調節GABA^受體d2亞型和僅，亞型mRNA表達水平有關。

關鍵詞紫果西番蓮葉；焦慮；高架十字迷宮；1一氨基丁酸A型受體

紫果西番蓮(P．edu紜Si琊)，別名百香果，為西番蓮科(P0ss坍omce口e)西番蓮屬(幾黜耖％m L．)藤本植物，目前在我國臺灣、廣東、福建、廣西和云南等省區均大量栽培。西番蓮全草均可人藥，對于神**、一般性癲癇發作、癔病、間歇性**、更年期綜合征、心律失
常、高血壓有很好的療效。在熱帶國家普遍用作民間**用藥，在歐洲更是頗負盛名，適用于**睡眠失調和焦慮不安等多種**，然而筆者尚未見國內紫果西番蓮抗焦慮作用的研究報道。由此，筆者在本研究對紫果西番蓮葉的抗焦慮作用進行實驗研究。
1材料與方法
1．1動物健康雄性昆明種小鼠60只，級別：sPF，初始體質量20～25 g，合格證號：scxK(粵)2008旬002，購自廣東省醫學實驗動物中心。小鼠飼養于廣州**廣州總醫院動物實驗室sPF動物房。光照節律12L：12D(7：00～19：oo)，室溫(18±2)℃，相對濕度約50％，動物可以自行攝取標準飼料和清潔飲用水。
1．2 **與試劑 紫果西番蓮葉采自廣東梅州五華縣，經華南植物研究所韋強老師鑒定為西番蓮屬西番蓮科植物紫果西番蓮(P∞s汐om edu玩Si郴)的干燥葉；羧甲基纖維素鈉(sodium carboxyl methyl cellulose，cMc)；***(上海信誼醫藥公司，批號：10021122)；
Trizol試劑(TaKaRa Code：D9108A)；焦碳酸二乙酯(DEPc，廣州威佳科技有限公司)；D12000 DNAMarker(大連寶生物有限公司)；EB溶液(上海申能**生物公司)；M．MLV逆轉錄酶(nvitrogen)；sYBR
Premix Ex Taq’M(TaKaRa)；Loading Bufkr(TaKaRa)。引物合成和測序由上海捷瑞生物科技公司完成。
1．3儀器小鼠高架十字迷宮(由上海欣軟信息科技有限公司提供)；NAN0 DROP 2000；恒壓電泳儀(北京六一儀器廠)；恒溫水浴槽(上海精宏實驗設備公司)；GeneQ基因擴增儀(杭州博日科技有限公司)；熒光定量PcR儀(Qiage n、公司)；凝膠成像系統(universal Hood)
Ⅱ(Bio-Rad公司)。
1．4溶液的制備取紫果西番蓮葉粗粉160 g，用15倍量的60％乙醇80℃回流提取3次，每次2 h，合并濾液，濾液經旋轉蒸發減壓干燥得紫果西番蓮葉醇提物，臨用前用1％CMc進行溶解。***用1％CMc配成o．125 mg·mL‘1溶液，4℃保存，使用前混搖均勻。
1．5動物分組與給**法將小鼠隨機分為空白對照組、陽性對照組和紫果西番蓮提取物大、中、小劑量組共5組。其中紫果西番蓮提取物大、中、小劑量組分別按800，400，200 mg·k～·d。1灌胃給藥¨1，陽性對照組給予***2 mg·kg～·d～，空白對照組灌服等容積1％cMc。各組連續給藥7 d，于第7天在末次給藥1 h后8：00～16：00進行行為測試。
1．6 小鼠高架十字迷宮(EMP)實驗高架十字迷宮包括兩個開臂(長30 cm，寬5 cm)與兩個閉臂(長30 cm，寬5 cm，高15 cm)距地面50 cm。迷宮測試前將每只小鼠放人一個50 cm×50 cm×40 cm曠場箱中，任其自由探究5 min后迅速置于EPM的中央平臺處，使其頭部正對其中1個開放臂，記錄5 min內小鼠進入開臂次數、閉臂次數和迷宮中央區內的次數及在開臂與閉臂的運動時間。以進人開臂次數與總入臂次數的百分率及在開臂內運動時間與人臂總時間百分率代表抗焦慮作用指標。整個行為過程用Supermaze軟件實時分析實時監測。每測試完一只用濕布擦拭迷宮，**糞便，用干布擦拭干凈后再進行下一只小鼠的測試。
1．7 鼠腦組織中1一氨基丁酸A型(GABA。)受體僅2和僅，亞型mRNA表達的檢測 小鼠EPM行為學測試結束后，立即處死，每組分別取5只小鼠的腦組織，無菌條件下分離全腦，將腦組織置于預冷的研缽中，在液氮條件下搗碎成粉末，按試劑盒說明用TRIz01試劑提取腦組織總RNA，用1％瓊脂糖凝膠電泳來鑒定RNA的完整性后，用半定量RT—PcR方法檢測GABA。受體d：亞型和0【，亞型mRNA水平的表達，以B—actin作為內參照，僅2亞型上游引物5’一GcTAcGC吼～C—
ACAACCTC一3’，下游弓I物5 7一TCA7ITGAC711ACACT—C1Trcc．3’；o【，亞型上游引物5’．CAACTAC rITIICACcAAGCGG．3 7，下游弓l物5’．CGGGAAATrITGTCAACCT一37；PcR反應條件：94℃5 min預變性，94℃30 s，53．6℃30 s，72℃45 s，擴增38個循環，72℃延伸7 min，PcR產物進行3％瓊脂糖凝膠電泳。Real—timePcR 分析：僅：亞型上游引物 5 7一AATcT—GGACTCCTGA‘rACCTTC．3’，下游弓I物5 7一CATTCGGcTTGGAcTGTAAG一3 7；d，亞型上游引物5’一AAGT—GCACAGGATGGCTCACG一3’，下游弓l物5’一ACATGG—
CAAGTAGGTCTGGATGAC-3 7；Real-time PCR反應結束后，應用PcR儀軟件分析反應結果，檢測各樣本中的c。值，以Delta—delta c。法分析各組GABA。受體僅2亞型和儀，亞型基因相對表達量。
1．8統計學方法 應用sPSsl8．o版for windows統計軟件包對數據進行統計分析，實驗數據用均數±標準差(孑±s)表示，采用單因素方差分析(one—wayANOVA)進行檢驗。P<o．05為差異有統計學意義。

3討論
紫果西番蓮在巴西民間作為**焦慮癥的**，文獻研究表明，紫果西番蓮提取物與***的不同之處是在抗焦慮的同時，不阻斷記憶過程。本研究采用RT—PCR和Real-time PCR兩種方法對紫果西番蓮葉提取物是否通過GABA。型受體僅：亞型和僅，亞型來發揮抗焦慮作用進行了探討，結果顯示800及400 mg·kg～·d一的紫果西番蓮葉提取物相對于空白對照組，僅：亞型和儀，亞型mRNA的相對表達量
差異有統計學意義(P<0．01)，提示紫果西番蓮提取物的抗焦慮作用與GABA．型受體有關。