電針抗抑郁研究的模型探討

【 摘 要】 目的：探討電針抗抑郁研究適宜模型的選擇。 方法： 選用**實驗方法， 觀察去甲腎上腺素毒性實驗小鼠的死亡率、5-羥色胺酸甩頭實驗小鼠甩頭次數。 用改變環境條件的方法， 觀察懸尾實驗小鼠懸尾的不動時間和通過慢性應激模型觀察開野實驗大鼠的活動性及檢測糖水實驗糖水的攝入量。 結果： 與空白對照組相比，電針不能降低去甲腎上腺素毒性實驗小鼠的死亡率，不能減少 5-羥色胺酸甩頭實驗小鼠的甩頭次數；但能減少懸尾實驗小鼠懸尾的不動時間；慢性應激模型中，與模型組及模型束縛組相比，電針組和百優解組可明顯增加開野實驗的垂直運動次數及糖水的攝入量。 結論： 針刺對抑郁癥的實驗研究應選擇改變環境條件誘發的抑郁動物模型進行，**誘發的抑郁模型可能是不適宜的。
【 關鍵詞】 抑郁 慢性應激 電針 動物模型

抑郁癥是由多種原因引起的、以抑郁為主要癥狀的一組心境障礙或情感障礙， 近年來發病率不斷上升，嚴重影響著人們的身心健康， 同時， 抑郁患者還伴有嚴重的**傾向。 該病已在我國**經濟負擔排名中占到**位，為 6.2%。

抑郁癥目前的**方法主要是****， 過去以單胺氧化酶抑制劑和三環類抗抑郁劑為主， 近年來發展了以百優解 （ 鹽酸氟西汀）為代表的 5-羥色胺能抗抑郁劑。 由于抑郁癥是多系統病變， ****多針對單靶點進行，長期應用療效降低，且有嚴重的毒副作用和過量的危險性。 而針刺**抑郁癥在臨床實踐中已取得了一定的療效， 具有整體調節的優勢，且無毒、副作用。
目前進行抑郁研究的動物模型主要有兩大類，**誘發的抑郁動物模型和改變環境條件誘發的抑郁動物模型。 許多學者從**研究的角度對這兩大類模型進行了評價。 但針刺的作用機理不同于**，所以要開展針刺抑郁的研究首先要選擇符合針
刺作用原理的抑郁模型。 我們選擇了**誘發模型中的去甲腎上腺素毒性實驗和 5-羥色胺酸甩頭實驗及改變環境條件誘發的抑郁動物模型中的小鼠懸尾實驗和慢性應激模型進行了探討。
1 材料與方法
1.1 材料
去甲腎上腺素 （ Norepinephrine， NE）由上海禾豐制藥有限公司提供，5-羥色胺酸 （ 5-hydroxytryptophan，5-HTP）由美國 Mp 公司提供， 鹽酸帕吉林 （ hydrochloric pargylin）由美國 Sigma 公司提供，陽性對照藥百優解由英國禮來公司提供。 韓氏 （ H ·A ·N ·S）LH202 型電針儀由北京華衛產業開發公司提供。 雄性昆明種小鼠及 SD 大鼠由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，清潔級。
1.2 電針方法
按動物選**譜選取相當于人體解剖部位的印堂穴和百會穴， 它們為針刺**抑郁癥的常用穴。平刺進針， 接電針儀， 大鼠、小鼠電針頻率均為2 Hz，小鼠進針深度為 0. 2 ～ 0.5 cm， 電流強度為0.2 ～0.3 mA，大鼠進針深度為 0. 5 ～ 1 cm， 電流強度為 0.6 mA，以頭部微顫為宜。 由于 “ 百會” “ 印堂”穴相距較近，在電針操作中需要注意避免短路。
1.3 去甲腎上腺素 （ NE）毒性實驗
將雄性昆明小鼠 （ 18 ～ 22 g）按體重隨機分為 3組，空白組、百優解組、電針組， 每組 10 只。 百優解組給藥量為 2.6 mg / kg，按 0. 2 mL / 10 g 灌胃， 每日 1次， 連 續 給 藥 1 周。 電 針 組 每 日 電 針 1 次， 每 次20 min，連續 1 周。 各組于第 7 d 電針及給藥 1 h 后皮下注射 NE （ 12 mg / kg） ［ 2］，**濃度為 1.2 mg / mL，
然后將小鼠置于塑料籠中， 自由飲水、 進食。 48 h后，觀察各組小鼠的死亡數。
1.4 5-羥色胺酸 （ 5-HTP）甩頭實驗
動物及分組、 百優解給藥及電針方法同 1. 3。第 7 d 腹腔注射鹽酸帕吉林 100 mg / kg，30 min 后針刺組電針 20 min，1 h 后百優解組灌胃給藥， 再過 30min，尾靜脈注射 5-HTP 10 mg / kg ［ 3］， 并立即放入 24cm × 15 cm × 15 cm 的小鼠箱內， 累計每 5 min 內小鼠的甩頭次數，共測定 25 min。
1.5 小鼠懸尾實驗
動物及分組、 百優解給藥及電針方法同 1. 3。第 7 d 針刺和給藥 1 h 后， 采用由上海欣軟信息科技有限公司提供的懸尾實驗系統裝置測試 記錄各組小鼠的懸尾不動時間。
1.6 慢性應激模型

造模方法：根據文獻方法改進 ［ 5］， 取 SD 大鼠 50只，體重為 160 ～ 180 g，通過開野實驗將水平運動次數加垂直運動次數不足 30 次或超過 120 次的大鼠剔除，然后按體重隨機分組， 分為空白對照組、模型組、百優解組、模型束縛組 （ 由于選擇慢性應激模型，電針同時會對大鼠產生束縛的應激刺激， 為了避免因此而造成的誤差，我們加設了模型束縛組，造模同時給予大鼠與針刺相同方式及刺激時間的束縛）、電
針組，每組 10 只。 造模動物全部孤養， 接受 7 種不同的應激刺激 21 d，包括冷水游泳 （ 10 ℃，5 min）、夾尾 （ 3 min）、禁水 （ 24 h）、禁食 （ 24 h）、電擊 （ 電壓為 30V，電 擊 5 s， 間 歇 5 s 共 進 行 2 min）、 晝 夜 顛 倒（ 24 h）、溫箱 （ 40 ℃，5 min）， 平均每種刺激 3 次。 正常組大鼠每籠 5 只飼養， 不予任何刺激。 造模同時給藥及給予針刺** （ 方法同上）。 于第 22 d 進行
開野實驗及糖水實驗測定。
開野實驗方法：按照參考文獻，本實驗所用敞箱為立方形，高 40 cm，長、寬均為100 cm， 周壁、底面為灰色，該儀器由上海欣軟信息科技有限公司提供，底板在電腦上由Supermaze動物行為學分析軟件分成25宮格，將大鼠置于敞箱底面的中心方格內，開始進行測試，每只動物測定 1 次， 每次測定時間為 180 s，記錄水平運動次數及垂直運動次數。
糖水試驗方法：將大鼠禁水 24 h 后，給予 1%的蔗糖水，加瓶重 250 g，24 h 后稱量蔗糖水瓶的重量，計算大鼠在 24 h 內蔗糖水消耗量。
1.7 統計方法
數據以- x ± s 表示，用統計學軟件 SPSS 11. 0 進行單因素方差分析，以 P < 0. 05 作為差異顯著性水平。 NE 毒性實驗以百分率表示，進行x2檢驗。
2 結 果
2.1 電針對 NE 毒性實驗小鼠死亡率的影響

表 1 結果表明， 給予亞致死量的 NE， 電針組與空白組的小鼠死亡率無顯著性差異， 而百優解組小鼠死亡率明顯高于空白組。
2.2 電針對 5-HTP 誘發的小鼠甩頭實驗的影響
給予 5-HTP 后小鼠迅速出現了 “ 甩頭”動作， 在10 ～ 25 min 之間甩頭的頻率達到了高峰。 由表 2 可見，電針組小鼠的甩頭次數與空白組無明顯差異，而百優解組可以顯著增加 5-HTP 誘發的小鼠甩頭動作。

2.3 電針對小鼠懸尾實驗不動時間的影響

由表 3 可見， 在小鼠懸尾記錄的 5 min 里， 電針組的不動時間明顯少于空白組， 百優解組也可縮短小鼠懸尾的不動時間，同時，電針組與百優解組比較亦有顯著性差異。
2.4 電針對慢性應激模型大鼠開野實驗的影響

由表 4 可見， 慢性應激及在慢性應激基礎上加束縛刺激均對大鼠的行為產生了影響， 模型組和模型束縛組開野實驗的水平運動次數和垂直運動次數都明顯少于空白組； 給予陽性對照藥百優解的大鼠在垂直運動次數上與模型組存在顯著性差異； 電針組對應激模型抑郁行為的影響在水平運動次數和垂直運動次數上都有表現， 即與模型束縛組在水平運動上存在顯著差異， 垂直運動次數顯著多于模型組和模型束縛組。
2.5 電針對慢性應激模型大鼠糖水攝入量的影響

由表 5 可見， 模型組及模型束縛組的糖水攝入量顯著低于空白組；電針組與模型束縛組比較，糖水攝入量明顯增多； 百優解組與模型組大鼠相比亦有顯著性差異。
3 討 論
**誘發的抑郁動物模型出現較早， 是根據抑郁癥的單胺假說設計的， 多用于評篩具有某專一神經化學作用的抗抑郁藥的藥理作用。

抑郁癥的發病機制之一被認為是由于機體內單胺遞質含量減少所致。 具有抗抑郁作用的**可能通過使體內單胺遞質含量增多， 從而產生抗抑郁作用。 設計 NE 毒性實驗， 給小鼠腹腔注射亞致死量的 NE，再給予受試藥。 如果受試藥可以增加小鼠體內的 NE 含量，則達到致死量或超過致死量的 NE 可引起小鼠的死亡。 5-HTP 甩頭實驗與 NE 毒性試驗的原理相類似， 不同的是試驗給予鹽酸帕吉林、5-HTP 引起小鼠甩頭動作， 若再給予受試藥使體內的5-HT 含量增多時，小鼠在特定時間段內的甩頭次數也可增多。
近年來研究發現， 應激性生活事件是抑郁癥的明顯促發因素，并且認為，慢性、低強度、長期的日常壓力是引發抑郁的主要原因。 為此設計了通過改變周圍環境誘發動物行為異常的抑郁動物模型。 這類動物模型力圖模擬抑郁病人環境誘因， 以異常行為作為觀測指標， 進行抑郁病因學的研究。 設計小鼠懸尾實驗，給予受試藥后，通過觀察小鼠懸尾后不再掙扎的不動時間， 來判斷小鼠對環境變化引起的絕望心理的持續時間，從而觀察受試藥的抗抑郁療效。模擬人的慢性應激刺激設計慢性應激模型， 通過給予大鼠長期的慢性應激刺激， 導致大鼠產生抑郁狀態，在造模同時加入干預手段，通過造模后的行為學觀察，判斷干預手段的抗抑郁作用。
針刺的作用機理不同于**， 針刺對機體具有雙向調節作用，通過對機體的良性調節作用，使機體處于動態平衡狀態。 在 NE 毒性實驗和 5-HTP 甩頭實驗中，針刺的作用應體現為使體內升高的物質含量降低。 但本 NE 毒性實驗結果顯示， 電針不能改
善亞致死量的 NE 引起的小鼠毒性作用。 我們認為，NE 毒性實驗的造模方法， 使體內的 NE 含量迅速升高，而電針不可能迅速阻斷 NE 在體內的擴散，從而不能降低小鼠的死亡率。 同樣， 在 5-HTP 甩頭實驗中，迅速地給予 5-HTP 和鹽酸帕吉林，使小鼠體內兩種物質迅速升高， 電針不能在短時間內完全阻斷這兩種物質的作用，從行為學上看，不能迅速減緩5-HTP 和鹽酸帕吉林引起的甩頭行為。 可見這種**誘發的急性實驗不符合針刺的作用機理。 而**誘發的抑郁動物模型為急性實驗模型， 故推論不適于針刺抗抑郁的研究。 因針刺雖具有雙向調節作用，但存在作用強度和時效積累的問題。

在改變環境誘發的抑郁模型中， 針刺能改善動物對**刺激的反應。 電針通過調整機能平衡， 從而抑制懸尾引起的小鼠絕望行為， 縮短小鼠懸尾的不動時間；電針又可以增強慢性應激后大鼠的活動度，增強其探究行為，同時能改善由于慢性應激刺激

導致的抑郁狀態 。

綜上結果分析可見， 針刺對抑郁癥的實驗研究應選擇改變環境條件誘發的抑郁動物模型進行， **誘發的抑郁模型可能是不適于針刺研究的。