Morris水迷宮實驗準則(3)
實驗流程準則
Morris水迷宮實驗主要測定空間學習記憶能力,主要的實驗內容有隱蔽站臺試驗、空間探索試驗、反向試驗和可視站臺試驗等。在這里主要介紹下文獻里面主要做的隱蔽站臺試驗和空間探索試驗的流程準則。
隱蔽站臺試驗:
嚙齒類動物**次游泳時,一般不會找到藏于水面下的不可見的站臺。若動物在入水游泳60~90s以內仍未能找到水池中的站臺或未能爬上站臺時,實驗人員可將動物引導置于站臺上站立10~30s,使動物體會站在站臺上的感覺,這樣從**次開始,學習成績就能迅速提高。動物爬上站臺后,讓動物在站臺上站立5~10s。將大鼠從站臺上拿下來,休息30~60s以后再進行下一次訓練。在一般情況下,正常大鼠在經過4~6個實驗日訓練后,很快就學會以*快*佳的軌跡搜索到站臺的確切位置。
每天開始時,將鼠任意從四個象限(東北、西北、東南、西南)之一面向池壁放入水中,站臺放置于東南象限, 每次實驗鼠共游泳60~90s來尋找隱藏的站臺。如果成功地找到站臺,鼠可以得到在站臺上的10~30s休息時間;如果60~90s內未能成功的找到站臺,就由實驗人員將鼠人工置于站臺上,且同樣給予10~30s的休息時間。有時鼠可能會在10~30s間隔時間到達之前從站臺上掉下或跳入水中繼續游泳。一旦這種情況發生,則將鼠重新放回站臺,并重新計時,使時間間隔到達(10~30s)。這樣可以確保每只鼠在每次實驗后有相等的時間來觀察和獲取空間信息。
空間探索試驗:
隱蔽站臺試驗結束24h后,撤除站臺。然后任選一相同入水點將鼠放入水中,記錄鼠在60s或120s內的游泳路徑,記錄鼠在原站臺象限的停留時間和穿越原站臺次數,觀察受試鼠的空間定位能力,及在空間探索過程中的變化規律。在電腦屏幕上用圓形環標記出站臺原所在位置,這樣可以記錄穿越原站臺所在位置的次數。
1、 實驗時間:隱蔽站臺試驗一般設計天數為4天或者6天,如果是年老體弱鼠可以將天數設計為4天。訓練時間一般為60s或90s,也有用120s的,不過現在一般都改用60s了,有人做過實驗,大鼠在60~120s之間能夠找到隱藏站臺的次數差異大約只占其找到平臺總次數的5%, 這在統計學上是“小概率事件”。也就是說, 大鼠在60s內找不到隱藏站臺的話, 再延長到120s也很難找到。而且60s還可以減小各組的標準差, 可以節約實驗時間。但問題并非如此簡單,隱蔽站臺試驗潛伏期應采用重復測量, 由于在統計時, 很多研究將*大潛伏期直接納入統計, 顯然, *大潛伏期的不同將不可避免地影響統計結果。所以從統計學上了解不同的*大潛伏期到底對Morris 水迷宮實驗結果有多大的影響, 如何避免因此帶來的系統誤差等問題尚有待進一步研究。國外文獻報道,如果水池的直徑在 2m,可以設置單次訓練時間為120s,直徑在1m至1.5m,選擇訓練時間為60s, 鑒于此,我們認為訓練時間60s較為合適。時間過長,對鼠體力消耗也會過大。
2、 實驗次數:在隱藏站臺試驗中,每天訓練4次,每個象限每天只被使用一次,一定不要將大鼠連續地放入同一個象限,因為大鼠可能會憑借位置或其他非記憶信息(如向右轉彎)來定位站臺。而且,接下來每天的象限順序應當改變。在空間探索試驗中,將大鼠置于水池中追蹤120s,這個過程需要重復一次,因為在有些情況下,**實驗會觀察到一些非正常變量,可能一些老鼠在改變了實驗條件后迷失了方向。連續進行的兩次實驗計算平均值可以減少偏差,可以提供一個較高的精度和對先前學習記憶的較好控制。但是如果實驗次數多于兩次,將會導致在目的象限活動時間減少,得到不準確的空間探索結果。
3、 實驗動物:并非所有鼠株都適合于Morris迷宮測試,如近交系BALB/c小鼠不能學會該任務(成績并不隨天數的增加而進步),129/SvJ小鼠的學習成績也偏差;比如129/SvJ株的小鼠由于有年齡相關性視路病變,在衰老時完成以視覺為基礎的學習記憶任務時就會出現困難。在C57BL/6鼠,由于嚴重的禿頭癥存在,可能使某些小鼠產生抑郁,加上潰瘍性皮炎,*終可能影響小鼠的游泳能力而影響實驗成績;將動物浸入水中可能引起***或其它應激效應,后者與腦損害或藥理學操作間的相互作用具有不確定性;由于體力消耗太大,體溫也喪失過多,一些年老體弱鼠完成任務較困難,甚至會發生溺水死亡的情況;另外,個體間的成績差異也巨大,比如說,有些正常大鼠放入水中后左右觀望打圈確定方向后直接游到臺上,說明他記憶力比較好,這個現象是很重要的,有的大鼠游泳速度慢些,所以潛伏期時間比癡呆組還大。所以可以先用別的方法把大鼠初篩一下,然后再來跑水迷宮。
4、 實驗人員:實驗者應與受試動物建立良好的感情,讓動物熟悉實驗者的身體信息,如氣味、相貌等。捕捉動物的動作要溫柔,不要刺激動物。忌諱用手抓鼠的尾巴,因為這樣會極大的刺激動物。有人建議在實驗開始的兩三天之前,與鼠親密接觸。實際上鼠的嗅覺很敏感,如實驗人員為女性的話,其身上的香水味不同,都會使鼠的情緒發生變化的